Vědci z Institutu Maxe Plancka (MPI)
vyvinuli postup umožňující dosáhnout
pod optickým mikroskopem rozlišení
do úrovně 15 nanometrů. Tím byla překonána
hranice 200 nanometrů, dosud
považovaná za mez rozlišení ve viditelném
světle.
Tato hranice byla od doby vynálezu mikroskopu
v 17. století považována za konečnou
vzhledem k difrakci světla. Tento jev
popsal německý fyzik Ernst Abbe v roce
1873. Zjistil, že struktury které jsou ve vzájemné
vzdálenosti menší než 200 nm, se při
pozorování pod optickým mikroskopem
jeví jako neostrý obraz jednoho objektu.
Vzhledem k tomu, že difrakce je působena
vlnovým šířením světla, byla omezená
rozlišovací schopnost optických mikroskopů
považována za nepřekročitelnou a pro
dosažení většího rozlišení začaly být používány
elektronové mikroskopy.
To se před několika roky změnilo, protože
výzkumníci z oddělení nanobiofotoniky
MPI vyvinuli pro Biofyzikální chemii
v Göttingenu techniku, která překračuje
rozlišovací hranici definovanou Abbem. Je
to mikroskopie STED (Stimulated Emission
Depletion). Využívá dva překrývající se
laserové paprsky. Protein se označí látkou,
která světélkuje po nabuzení světelným
paprskem. Jedním menším paprskem se
látka nabudí, a tato molekula pak zůstává
nabuzena a fluoreskuje při pozorování ve
světle druhého, většího paprsku. Výzkumný
tým tuto metodu ověřil zviditelněním
proteinu synaptotagminu, který je obsažen
v buněčné bláně jako jakýsi váček, bublina
s průměrem přibližně 40 nm. Obsahuje neuropřenašeče,
jež posunují chemické signální
molekuly do kontaktních bodů mezi nervovými
buňkami. To umožňuje šíření nervových
signálů v buněčné tkáni. Dosud bylo
nejasné, zda proteiny obsažené ve váčku
se po spojení s buněčnou blanou rozptýlí,
nebo zůstanou pohromadě jako zbytek váčku.
Pomocí STED mikroskopie bylo zjištěno,
že molekuly synaptogaminu po spojení
s buněčnou blanou zůstanou pohromadě.
Nejnovější pokusy potvrdily, že technika
STED může dosáhnout rozlišení až
15 nm. Možnost pozorovat buňky v takovém
měřítku přispěje k poznání složitých
pochodů v buněčných tkáních. Umožní to
například pozorování funkce proteinů, jež
mají rozměry 2 až 20 nm. Ale podle profesora
Stefana Hella má technika STED před
sebou ještě velkou perspektivu. Pro pozorování
samotné molekuly fluoreskující látky
je nutno dosáhnou o řád lepšího rozlišení.
Vyžaduje to ostrost v rozsahu jednoho až
dvou nanometrů. A toho je teoreticky možno
technikou STED dosáhnout. /šu/